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imagejを使用して、画像の特定の領域の蛍光強度を測定する必要があります。強度を測定するために、以下の手順を考え出しました。正しいように見えますが、私の質問は->実際に次の手順を使用して強度を正しく測定しているのか、それとも他の何かを誤って測定してその値が強度であると信じているのかということです。

  1. 画像を8ビットにする
  2. 画像のしきい値を設定して（[画像]>[調整]>[しきい値]）、すべての領域の輪郭を描き、[適用]をクリックします
  3. [分析]>[粒子の分析]を開きます。「マネージャーに追加」がクリックされていることを確認してください
  4. 分析>粒子の分析>表示>裸の輪郭。これにより、新しい画像が開きます。
  5. カラー顕微鏡画像を開きます。次に、[画像]>[オーバーレイ]>[ROIマネージャーから]。
  6. 画像>オーバーレイ>ROIマネージャーへ。
  7. ROIマネージャーの場合：「測定」を押します。（個々のデータポイントを含む結果ウィンドウがポップアップ表示されます）
  8. [結果]ウィンドウを右クリックして、[要約]をクリックします。
  9. 平均強度データを記録する

上記の手順を使用して平均強度データを正しく測定していますか？

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imageJ で強度を測定する際に注意する必要があることがいくつかあります。

  1. ImageJ は画像を自動的に 8 ビットに変換します
  2. 可能な場合は、常に RAW を使用する必要があります
  3. 顕微鏡がファイルを RAW 形式で保存できない場合は、.tif を使用する必要があります。他の形式ではアーティファクトが作成されます
  4. .tif 形式を使用している場合は、チャンネルを RGB スタックとしてではなく個別に保存します

特に特定の波長からの蛍光を探している場合は、しきい値の前にチャネルを分割する必要があります。

また、しきい値の後に「Watershed」機能を使用する必要があります。これにより、個々のセルの輪郭が描かれ、一緒にグローブ化されたセルのグループの輪郭が描かれるのを避けることができます。このようにして、個々の強度を測定できます。ただし、これは完全ではないため、ROI が表示され、粒子分析によって細胞の輪郭が描かれたら、通過して特異細胞を測定していることを確認する必要があります。複数のセルを含むアウトラインはすべて削除する必要があります。また、削除する必要がある奇妙な形の細胞または微小核を探します。

では、ヒトのがん細胞を測定しているとします。次の設定を使用する必要があります。

ここに画像の説明を入力

このすべての後、オーバーレイを適用します。オーバーレイする画像が何であれ、そのチャンネルも分割し、測定している波長を含むチャンネルを使用する必要があります (つまり、Alexaflour 488 は GFP チャンネルになります)。

これを行わずにデータを収集していた場合は、データを収集するために行われた手順では何も制御されていないため、すべてを破棄します。

また、このようなことをどこに尋ねるかについても。

于 2015-11-13T15:30:22.563 に答える